Массонабор

Что показывает анализ протеин с. Определение активности системы протеина с. Кто назначает анализ крови на протеины S и C

Метод определения

Автоматический анализатор параметров свёртывающей системы ACL TOP, метод - кинетический колориметрический.

Исследуемый материал Плазма (цитрат)

Один из важнейших естественных ингибиторов свёртывания.

Протеин С - один из наиболее важных физиологических ингибиторов свёртывания. В активной форме он расщепляет и инактивирует факторы свёртывания VIIIa и Va (но не фактор V Лейдена). Протеин C проявляет антикоагулянтную активность, косвенно активирует фибринолиз, ограничивает размеры тромба. In vivo протеин С активируется тромбином, многократно ускоренно - комплексом тромбина и тромбомодулина (белок на поверхности эндотелиальных клеток).

Антикоагулянтную активность протеина C усиливает его кофактор - . Протеин C синтезируется в печени, является витамин К - зависимым белком, поэтому активность его зависит также от дефицита витамина K и терапии оральными антикоагулянтами. Уровень протеина С у новорождённых и детей младшего возраста физиологически ниже, чем у взрослых вследствие незрелости печени. Врождённый дефицит протеина С связан со склонностью к тяжёлым тромботическим нарушениям. Среди врождённых видов дефицита физиологических антикоагулянтов, таких как дефицит антитромбина III, дефицит протеина C, дефицит протеина S - дефицит протеина C наиболее распространён (0,2-0,4% популяции). Гомозиготные состояния проявляются в раннем детстве фульминантной пурпурой новорождённых и часто фатальны, уровень протеина C у таких новорождённых находится на неопределяемом уровне.

Пациенты с дефицитом протеина С обычно являются гетерозиготами, у которых тромбозы не проявляются ранее второй-третьей декады жизни. Среди них около 5% могут также иметь мутацию фактора V (фактор V Лейдена) в гетерозиготном состоянии. Присутствие этой мутации считают фактором риска развития ранней тромботической патологии (см. генетические исследования, тромбофилии, тест № 7171). Дефицит протеина C связан с повышенным риском осложнений беременности (тромбоз глубоких вен, преэклампсия, внутриутробная задержка развития плода и повторные выкидыши). Отмечается увеличенный риск развития варфарин-индуцированного некроза кожи. Усугубляется действие факторов риска, связанных с вредными привычками.

Врождённые дефицитные состояния могут быть диагностированы, когда причины приобретённого дефицита протеина C исключены. Исследование протеина C с данной целью не рекомендовано проводить во время острых заболеваний/острых тромботических эпизодов, вследствие потребления протеина С, а также у пациентов, получающих терапию оральными антикоагулянтами (варфарин понижает уровень протеина C).

Рекомендованы повторные тестирования протеина C после прекращения терапии оральными коагулянтами (лучше через месяц после окончания терапии), в корреляции с обследованием членов семьи. У гетерозигот по дефициту протеина C значения частично перекрещиваются с нормальным референсным диапазоном. Нарушение активации протеина С возникает при патологических состояниях, связанных с наличием таких факторов как гипоксия, эндотоксин, интерлейкин-1, фактор некроза опухоли альфа, высокий уровень гомоцистеина (все они ускоряют свёртывание, индуцируя экспрессию тканевого фактора и подавляя транскрипцию тромбомодулина эндотелиальными клетками).

Показана информативность тестирования протеина С в прогностических целях в септических состояниях (характеризуются повышенным потреблением, разрушением и нарушением синтеза протеина С). Уровень активности протеина С < 40%, а также снижение более чем на 10% за 1 день при сепсисе коррелирует с неблагоприятным прогнозом.

Литература

Shorr A.F. R92 Protein C concentrations in severe sepsis: an early directional change in plasma levels predicts outcome Critical Care 2006,10: R92 http://ccforum.com/content/10/3/R9.

Методические материалы фирмы-производителя реагентов.

Ген, ответственный за синтез протеина С, локализован на хромосоме 2 (ql3-ql4). Основная функция этого физиологического антикоагулянта заключается в инактивации основных неферментных факторов свертывания (FVa, FVIlla).

У пациентов, имеющих врожденную недостаточность протеина С, наблюдается склонность к рецидивирующим тромбозам и тромбоэмболиям. Дефицит протеина С наследуется аутосомно, гомозиготы и двойные гетерозиготы погибают в раннем детском возрасте от тромбозов.

Принцип метода

Метод основан на оценке АПТВ смеси (разведенный образец БТП, дефицитная по протеину С плазма, активатор протеина С, АПТВ-реагент). Протеин С исследуемого образца БТП активируют реагентом, полученным из яда щитомордника Agkistrodon contortrix. Активированный протеин С разрушает коагуляционные факторы Va и Villa, содержащиеся в смеси исследуемого образца и добавляемой протеин-С-дефицитной плазмы, за счет чего после добавления кальция хлорида регистрируется удлинение АПТВ. При низкой активности протеина С удлинение АПТВ выражено незначительно. Разведения калибровочного образца БТП позволяют построить кривую и определить активность протеина С.

Реактивы и оборудование

Активатор протеина С (Protac).
АПТВ-реагент.
Дефицитная по протеину С плазма.
Буферный раствор.
Образец БТП с известной активностью протеина С.
Коагулометр.

Образцы крови для исследования

Для определения активности протеина С используют БТП.

Для построения калибровочной кривой необходим образец БТП с известной активностью протеина С. Для построения калибровочного графика используют время свертывания в секундах, полученное при исследовании разведенных калибровочных образцов с известной активностью протеина С.

В клинической картине при врожденном дефиците протеина С доминируют рецидивы венозных тромбозов и тромбоэмболий. У ряда пациентов возникают кожные некрозы, невынашивание беременности и др. У новорожденных, имеющих дефицит протеина С, нередко наблюдается злокачественная пурпура (purpura fulminans).

Приобретенный дефицит протеина С может быть обусловлен недостаточным синтезом гепатоцитами, повышенным расходом вследствие ДВС, лечением непрямыми антикоагулянтами и др. У некоторых пациентов с ВА наблюдается завышение его активности.

Причины ошибок

Ошибки преаналитического этапа исследования.
Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.

Другие аналитические технологии

Функциональную активность протеина С определяют амидолитическими или коагуляционными методиками.

Для определения концентрации протеина С используют ИФА, однако при сравнении результатов иммунологических и функциональных методик наблюдается несовпадение результатов у пациентов с молекулярными аномалиями протеина С.

Активность протеина S

Протеин S - витамин К-зависимый гликопротеид, участвующий в качестве неферментного кофактора активированного протеина С в протеолитической деградации коагуляционных факторов Va и Villa. Ген, ответственный за синтез протеина S, расположен на хромосоме 3 человека в положении pll.l-qll.2. В крови протеин S представлен в двух вариантах: в виде свободного протеина (около 40 %) и в виде связанного с С4Ь-компонентом комплемента (около 60 %). Снижение активности протеина S увеличивает риск развития тромбозов и тромбоэмболий.

Принцип метода

Функциональные методики основаны на учете выраженности удлинения времени свертывания смеси дефицитной по протеину S плазмы и исследуемой плазмы при введении в тест-систему активированного протеина С. Для оценки времени свертывания в подобной тест-системе производители используют разные стимуляторы коагуляции (яд гадюки Рассела, АПТВ-реагент, активированный коагуляционный фактор IX или др.). При нормальном содержании протеина S под влиянием активированного протеина С происходит существенное удлинение времени свертывания (за счет разрушения неферментных факторов коагуляции), тогда как при недостаточности протеина S оно выражено значительно слабее (за счет неэффективного разрушения неферментных факторов активированным протеином С).

Реактивы и оборудование

Дефицитная по протеину S плазма.
Активирующий реагент (фосфолипиды, яд гадюки Рассела или иные активаторы, нейтрализатор гепарина и др.)
Активированный протеин С.
Раствор кальция хлорида (0,025 М).
Буферный раствор.
Образец БТП с известным содержанием протеина S.
Коагулометр.

Образцы крови для исследования Для определения активности протеина S используют БТП.

Методика определения

Ход определения активности протеина S существенно различается при использовании реагентов и оборудования разных производителей, поэтому последовательность действий врача-лаборанта должна строго соответствовать инструкции к набору реагентов и его адаптации к имеющемуся в лаборатории коагулометру.

Оценка результатов исследования

Исследование времени коагуляции разведенных образцов БТП с известной концентрацией протеина S позволяет построить калибровочную кривую и определить активность этого физиологического антикоагулянта в процентах от нормы.

У здоровых людей активность протеина S находится в диапазоне 60-130 %.

Интерпретация результатов исследования

Врожденный дефицит протеина S - редкий дефект антикоагулянтного звена гемостаза. Первое описание дефицита протеина S было представлено в 1984 г. Н.Р. Schwarz at al. В клинической картине этого заболевания доминируют рецидивирующие флеботромбозы и тромбоэмболии. Как и многие другие дефекты антикоагулянтного звена гемостаза, эта патология передается аутосомно. Принято различать три типа врожденного дефицита протеина S.

Варианты врожденного дефицита протеина S

Тип: I Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Снижен; Общий протеин S: Снижен.
Тип: II Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Норма; Общий протеин S: Норма.
Тип: III Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Снижен; Общий протеин S: Норма.

I тип характеризуется низким содержанием протеина S при использовании разных вариантов его иммунологического определения, а также снижением его функциональной активности. При II типе дефицита наблюдается снижение функциональной активности, однако общая и свободная фракции протеина S не нарушены. III тип проявляется сочетанным снижением функциональной активности протеина S и свободной его фракции. Таким образом, для идентификации типа дефицита протеина S необходимо использовать коагуляционный и иммунологический методы его определения.

В клинической практике гораздо чаще встречается приобретенный дефицит протеина S. Снижение активности протеина S можно обнаружить при нефротическом синдроме, беременности, лечении эстрогенами, L-аспарагиназой и др. У новорожденных с дефицитом протеина S наблюдается злокачественная пурпура (purpura fulminans).

Причины ошибок

Гепарин из венозного катетера.
Гемолиз в исследуемом образце крови.
Неправильная дозировка цитрата при заборе крови.

Другие аналитические технологии Довольно широко распространен метод, основанный на применении ИФА для определения свободного протеина S и связанного с С4Ь-компонентом комплемента. Кроме того, описаны (но не представлены на рынке) функциональные методики определения этого антикоагулянта, основанные на использовании хромогенных субстратов.

Протеин С – это синтезируемый в печени белок, являющийся фактором XIV свертывания крови, одним из важнейших атикоагулянтных факторов, позволяющих крови находиться в жидком состоянии. Но для того чтобы этот фактор начал действовать, необходимо его активировать – эту задачу выполняет витамин К.

Дефицит протеина С в крови может привести к повышенному риску развития тромбов. Впрочем, нужно сказать, что эта патология встречается довольно редко. Помимо предотвращения свертывания крови протеин С способствует естественному отмиранию отработавших клеток организма и является агентом, снимающим и предотвращающим воспаление.

Норма протеина С в крови. Расшифровка результата (таблица)

Анализ крови на протеин С проводится совместно с анализом на его контрагент – протеин S, а также часто совместно с другими тестами на свертываемость крови. Его назначают, если пациент имеет необъяснимую склонность к образованию тромбов или же если тромбозы являются в данной семье генетически наследуемым заболеванием. Тем более такой анализ необходим, если тромбы образуются у пациента моложе 50 лет или в каком-то нетрадиционном месте, например, в печеночной вене или в сосудах головного мозга. Уровень протеина С необходимо выяснить при привычном выкидыше у пациентки или, если кто-то в семье страдал дефицитом этого протеина. Кроме того, анализ крови на протеин С помогает быстро выявить заболевания печени и дефицит витамина К в организме.

Забор крови производится из вены.

Норма протеина С в крови обычных людей и беременных женщин.

Если протеин С повышен, что это значит?

Как правило, повышение уровня протеина С в крови пациента не представляет клинического интереса и не используется в диагностике. Однако нужно понимать, что высокие показатели протеина С могут привести к возникновению трудноостанавливаемых кровотечений.

Если протеин С понижен, что это значит?

Дефицит протеина С в организме может быть наследственным, приобретенным или развиться в результате действия каких-то других факторов. В любом случае, снижение уровня протеина С приводит к патологиям, увеличивающим риск развития аномальных тромбов.

При умеренном дефиците протеина С пациент подвергается риску развития тромбоза глубоких вен. Такие тромбы образуются в венах, расположенных вдали от поверхности кожи и чрезвычайно опасны тем, что могут привести к легочной эмболии. Хотя, в большинстве случаев патологические тромбы так и не возникают, некоторые факторы могут значительно увеличить эту угрозу. Например возраст или оперативное вмешательство беременность или малоподвижный образ жизни.

Во время беременности норма протеина С в крови может уменьшаться и дефицит протеина может привести к повышению риска возникновения тромбозов, который сохраняется и после рождения ребенка. Дело в том, что беременность сама по себе является фактором риска для развития тромбозов. Кроме того, существует мнение, что пониженный уровень протеина С в крови будущей мамы может увеличит риск возникновения выкидыша, как на раннем, так и на позднем сроке беременности.

Тяжелый дефицит протеина С может привести к чрезвычайно опасному для жизни новорожденных детей явлению – молниеносной пурпуре. Так называется патология, при которой множественные сгустки крови образуются в мелких кровеносных сосудах, расположенных по всему телу. Эти сгустки приводят к блокированию нормального кровотока, а это приводит к некрозу тканей и гибели ребенка. Но даже у тех детей, которые сумели выжить, молниеносная пурпура может повториться в дальнейшем в любое время.

Дефицит протеина С может передаваться генетически. То есть, если в вашей семье уже были случаи подобного дефицита, вы более склонны к развитию этой патологии. Однако такой дефицит может возникнуть и без связи с генетикой. Например, в случаях:

дефицита витамина К в организме,
тяжелых заболеваний печени:
заболеваний почек,
тяжелых инфекционных заболеваний,
ДВС-синдрома,
онкологических заболеваний и распространения метастаз.

К снижению уровня протеина С в организме может привести использование некоторых разжижающих кровь лекарственных препаратов, например – варфарина.

При постановке женщины на учет и после 30 недели беременности очень важно проводить мониторирование основных показателей гемостаза. Изменение этих показателей в период беременности носит компенсаторно-приспособительный характер и направлено на формирование нормального фето-плацентарного комплекса и на снижение кровопотери при родах. Перечислим эти изменения:

Таким образом, при беременности в организме женщины создаются определенные условия для развития синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром): это выражается:

Перечисленные выше особенности гемостаза при беременности помимо изменений компенсаторно-приспособительного (позитивного) характера, могут приводить и к негативным последствиям – к развитию тромбозов (частота развития тромбофилий - состояний, при которых резко увеличивается риск развития тромбозов и тромбоэмболии - при беременности может достигать 30%) и это, как было указано выше, обуславливает высокую актуальность (значимость) мониторирования основных показателей гемостаза в период беременности.

На сегодняшний день существует возможность определять достаточно обширный спектр показателей гемостаза как тканевого, так и плазменного звена. Безусловно, проводить определение всех показателей – не рационально как с клинической, так и с экономической точки зрения. Рядом авторов рекомендуется поэтапный клинико-диагностический алгоритм выявления тромбофилических состояний у беременных:

читать

В настоящее время известно и хорошо изучено шесть основных генетически обусловленных форм тромбофилий:

Резистентность к активированному протеину С (мутация V фактора). Известно, что из шести выше перечисленных форм тромбофилий наиболее частым фактором риска в европейской популяции является резистентность к активированному протеину С (мутация V фактора - у гетерозигот риск развития тромбозов возрастает в 5 - 10 раз, а у гомозигот в 50 - 100 раз). Частота встречаемости мутации V фактора у пациентов с тромбофилиями достигает 40%. Диагностика резистентности активированного протеина С (аРС)может проводиться различными методами, но самым удобным скрининговым методом является клотинговый метод на коагулометре с использованием диагностических наборов.

Дефицит антитромбина III (АТ-III). АТ-III – естественный антикоагулянт. На его долю приходится 75 - 80% всего коагулянтного потенциала крови. Синтезируется в печени и в эндотелиальных клетках. Частота встречаемости у пациентов с тромбофилиями - 5%. Снижение активности АТ-III менее 60% может указывать на его наследственный дефицит, однако при диагностике необходимо исключить заболевания печени, т. к. нарушения ее функции наряду с септическими заболеваниями и острыми тромбозами являются главными причинами приобретенного и временного дефицита. Также при диагностике AT-III важно использовать хромогенный метод, основанный на способности плазмы инактивировать фактор Х(а).

Дефицит протеина С. Протеин С (PC) – естественный антикоагулянт, витамин К-зависимый гликопротеин, синтезируется в печени в неактивной форме. Частота встречаемости у пациентов с тромбофилиями - 4%. PC переходит в активную форму (АРС) путем взаимодействия с комплексом тромбин-тромбомодулин. Дефицит PC ведет к снижению концентрации aРС, что приводит к замедлению инактивации факторов Va и VIII(a). Различают два типа дефицитных состояний: тип I - количественный дефицит протеина С (снижен синтез или снижено время жизни белка) и тип II - нарушение структуры белка. Описаны нарушения структуры белка, приводящие к нарушению взаимодействия с фосфолипидами, тромбомодулином, факторами V/VIII и другими веществами. Протеин С можно определять различными методами: хромогенными, клоттинговыми и иммуно-химическими. Оптимальные для клинической интерпретации результаты получаются при использовании хромогенного метода.

Дефицит протеина S. Протеин S (PS) – неэнзиматический кофактор протеина С, участвует в инактивации V и VIII факторов, обладает своей, независимой от протеина С, антикоагулянтной активностью. PS – витамин К-зависимый гликопротеин, синтезируется в печени. Существует в двух формах: свободный протеин S и связанный с С4 (протеин комплимента). В норме 60 - 70% находится в связанном виде. Уровень связывания PS с С4 определяет его активность, т.к. активна только свободная форма. В норме уровень PS 80 - 120%, при беременности его уровень падает и составляет 60 - 80%. Частота встречаемости наследственного дефицита у пациентов с тромбофлиями - 4%. Наиболее точно определение концентрации свободного PS осуществляют
иммунологическим методом.

Мутация гена протромбина G 20210 А. Вследствие данной мутации увеличивается синтез протромбина. Частота встречаемости среди пациентов с тромбофилией - 1%. Диагностика - молекулярно-генетический метод.

Гипергомоцистеинемия (ГГЦ) определяется у пациентов с тромбофилией с частотой 13 - 27%. ГГЦ может быть следствием дефекта фермента или дефицита фолиевой кислоты и витаминов В12 и В6. Молекулярные механизмы, которые вызывают тромбогенные воздействия, не идентифицированы до сих пор. Определение гомоцистеина проводится методом ИФА (иммуно-ферментный анализ).

Повышенная активность VIII фактора. Постоянное повышение активности VIII фактора более 150% без одновременного повышения концентрации С-реактивного белка как показателя реакции острой фазы, отмечается примерно у 20% пациентов с тромбофилией. Наследственная причина повышения уровня VIII фактора в плазме до сих пор не идентифицирована. Определение активности VIII фактора наиболее целесообразно проводить с помощью хромогенного метода.