Что показывает анализ протеин с. Определение активности системы протеина с. Кто назначает анализ крови на протеины S и C
Метод определения
Автоматический анализатор параметров свёртывающей системы ACL TOP, метод - кинетический колориметрический.
Исследуемый материал Плазма (цитрат)
Один из важнейших естественных ингибиторов свёртывания.
Протеин С - один из наиболее важных физиологических ингибиторов свёртывания. В активной форме он расщепляет и инактивирует факторы свёртывания VIIIa и Va (но не фактор V Лейдена). Протеин C проявляет антикоагулянтную активность, косвенно активирует фибринолиз, ограничивает размеры тромба. In vivo протеин С активируется тромбином, многократно ускоренно - комплексом тромбина и тромбомодулина (белок на поверхности эндотелиальных клеток).
Антикоагулянтную активность протеина C усиливает его кофактор - . Протеин C синтезируется в печени, является витамин К - зависимым белком, поэтому активность его зависит также от дефицита витамина K и терапии оральными антикоагулянтами. Уровень протеина С у новорождённых и детей младшего возраста физиологически ниже, чем у взрослых вследствие незрелости печени. Врождённый дефицит протеина С связан со склонностью к тяжёлым тромботическим нарушениям. Среди врождённых видов дефицита физиологических антикоагулянтов, таких как дефицит антитромбина III, дефицит протеина C, дефицит протеина S - дефицит протеина C наиболее распространён (0,2-0,4% популяции). Гомозиготные состояния проявляются в раннем детстве фульминантной пурпурой новорождённых и часто фатальны, уровень протеина C у таких новорождённых находится на неопределяемом уровне.
Пациенты с дефицитом протеина С обычно являются гетерозиготами, у которых тромбозы не проявляются ранее второй-третьей декады жизни. Среди них около 5% могут также иметь мутацию фактора V (фактор V Лейдена) в гетерозиготном состоянии. Присутствие этой мутации считают фактором риска развития ранней тромботической патологии (см. генетические исследования, тромбофилии, тест № 7171). Дефицит протеина C связан с повышенным риском осложнений беременности (тромбоз глубоких вен, преэклампсия, внутриутробная задержка развития плода и повторные выкидыши). Отмечается увеличенный риск развития варфарин-индуцированного некроза кожи. Усугубляется действие факторов риска, связанных с вредными привычками.
Врождённые дефицитные состояния могут быть диагностированы, когда причины приобретённого дефицита протеина C исключены. Исследование протеина C с данной целью не рекомендовано проводить во время острых заболеваний/острых тромботических эпизодов, вследствие потребления протеина С, а также у пациентов, получающих терапию оральными антикоагулянтами (варфарин понижает уровень протеина C).
Рекомендованы повторные тестирования протеина C после прекращения терапии оральными коагулянтами (лучше через месяц после окончания терапии), в корреляции с обследованием членов семьи. У гетерозигот по дефициту протеина C значения частично перекрещиваются с нормальным референсным диапазоном. Нарушение активации протеина С возникает при патологических состояниях, связанных с наличием таких факторов как гипоксия, эндотоксин, интерлейкин-1, фактор некроза опухоли альфа, высокий уровень гомоцистеина (все они ускоряют свёртывание, индуцируя экспрессию тканевого фактора и подавляя транскрипцию тромбомодулина эндотелиальными клетками).
Показана информативность тестирования протеина С в прогностических целях в септических состояниях (характеризуются повышенным потреблением, разрушением и нарушением синтеза протеина С). Уровень активности протеина С < 40%, а также снижение более чем на 10% за 1 день при сепсисе коррелирует с неблагоприятным прогнозом.
Литература
Shorr A.F. R92 Protein C concentrations in severe sepsis: an early directional change in plasma levels predicts outcome Critical Care 2006,10: R92 http://ccforum.com/content/10/3/R9.
Методические материалы фирмы-производителя реагентов.
Ген, ответственный за синтез протеина С, локализован на хромосоме 2 (ql3-ql4). Основная функция этого физиологического антикоагулянта заключается в инактивации основных неферментных факторов свертывания (FVa, FVIlla).
У пациентов, имеющих врожденную недостаточность протеина С, наблюдается склонность к рецидивирующим тромбозам и тромбоэмболиям. Дефицит протеина С наследуется аутосомно, гомозиготы и двойные гетерозиготы погибают в раннем детском возрасте от тромбозов.
Принцип метода
Метод основан на оценке АПТВ смеси (разведенный образец БТП, дефицитная по протеину С плазма, активатор протеина С, АПТВ-реагент). Протеин С исследуемого образца БТП активируют реагентом, полученным из яда щитомордника Agkistrodon contortrix. Активированный протеин С разрушает коагуляционные факторы Va и Villa, содержащиеся в смеси исследуемого образца и добавляемой протеин-С-дефицитной плазмы, за счет чего после добавления кальция хлорида регистрируется удлинение АПТВ. При низкой активности протеина С удлинение АПТВ выражено незначительно. Разведения калибровочного образца БТП позволяют построить кривую и определить активность протеина С.
Реактивы и оборудование
- Активатор протеина С (Protac).
- АПТВ-реагент.
- Дефицитная по протеину С плазма.
- Буферный раствор.
- Образец БТП с известной активностью протеина С.
- Коагулометр.
Образцы крови для исследования
Для определения активности протеина С используют БТП.
Для построения калибровочной кривой необходим образец БТП с известной активностью протеина С. Для построения калибровочного графика используют время свертывания в секундах, полученное при исследовании разведенных калибровочных образцов с известной активностью протеина С.
В клинической картине при врожденном дефиците протеина С доминируют рецидивы венозных тромбозов и тромбоэмболий. У ряда пациентов возникают кожные некрозы, невынашивание беременности и др. У новорожденных, имеющих дефицит протеина С, нередко наблюдается злокачественная пурпура (purpura fulminans).
Приобретенный дефицит протеина С может быть обусловлен недостаточным синтезом гепатоцитами, повышенным расходом вследствие ДВС, лечением непрямыми антикоагулянтами и др. У некоторых пациентов с ВА наблюдается завышение его активности.
Причины ошибок
- Ошибки преаналитического этапа исследования.
- Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
Другие аналитические технологии
Функциональную активность протеина С определяют амидолитическими или коагуляционными методиками.
Для определения концентрации протеина С используют ИФА, однако при сравнении результатов иммунологических и функциональных методик наблюдается несовпадение результатов у пациентов с молекулярными аномалиями протеина С.
Активность протеина S
Протеин S - витамин К-зависимый гликопротеид, участвующий в качестве неферментного кофактора активированного протеина С в протеолитической деградации коагуляционных факторов Va и Villa. Ген, ответственный за синтез протеина S, расположен на хромосоме 3 человека в положении pll.l-qll.2. В крови протеин S представлен в двух вариантах: в виде свободного протеина (около 40 %) и в виде связанного с С4Ь-компонентом комплемента (около 60 %). Снижение активности протеина S увеличивает риск развития тромбозов и тромбоэмболий.
Принцип метода
Функциональные методики основаны на учете выраженности удлинения времени свертывания смеси дефицитной по протеину S плазмы и исследуемой плазмы при введении в тест-систему активированного протеина С. Для оценки времени свертывания в подобной тест-системе производители используют разные стимуляторы коагуляции (яд гадюки Рассела, АПТВ-реагент, активированный коагуляционный фактор IX или др.). При нормальном содержании протеина S под влиянием активированного протеина С происходит существенное удлинение времени свертывания (за счет разрушения неферментных факторов коагуляции), тогда как при недостаточности протеина S оно выражено значительно слабее (за счет неэффективного разрушения неферментных факторов активированным протеином С).
Реактивы и оборудование
- Дефицитная по протеину S плазма.
- Активирующий реагент (фосфолипиды, яд гадюки Рассела или иные активаторы, нейтрализатор гепарина и др.)
- Активированный протеин С.
- Раствор кальция хлорида (0,025 М).
- Буферный раствор.
- Образец БТП с известным содержанием протеина S.
- Коагулометр.
Образцы крови для исследования Для определения активности протеина S используют БТП.
Методика определения
Ход определения активности протеина S существенно различается при использовании реагентов и оборудования разных производителей, поэтому последовательность действий врача-лаборанта должна строго соответствовать инструкции к набору реагентов и его адаптации к имеющемуся в лаборатории коагулометру.
Оценка результатов исследования
Исследование времени коагуляции разведенных образцов БТП с известной концентрацией протеина S позволяет построить калибровочную кривую и определить активность этого физиологического антикоагулянта в процентах от нормы.
У здоровых людей активность протеина S находится в диапазоне 60-130 %.
Интерпретация результатов исследования
Врожденный дефицит протеина S - редкий дефект антикоагулянтного звена гемостаза. Первое описание дефицита протеина S было представлено в 1984 г. Н.Р. Schwarz at al. В клинической картине этого заболевания доминируют рецидивирующие флеботромбозы и тромбоэмболии. Как и многие другие дефекты антикоагулянтного звена гемостаза, эта патология передается аутосомно. Принято различать три типа врожденного дефицита протеина S.
Варианты врожденного дефицита протеина S
- Тип: I Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Снижен; Общий протеин S: Снижен.
- Тип: II Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Норма; Общий протеин S: Норма.
- Тип: III Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Снижен; Общий протеин S: Норма.
I тип характеризуется низким содержанием протеина S при использовании разных вариантов его иммунологического определения, а также снижением его функциональной активности. При II типе дефицита наблюдается снижение функциональной активности, однако общая и свободная фракции протеина S не нарушены. III тип проявляется сочетанным снижением функциональной активности протеина S и свободной его фракции. Таким образом, для идентификации типа дефицита протеина S необходимо использовать коагуляционный и иммунологический методы его определения.
В клинической практике гораздо чаще встречается приобретенный дефицит протеина S. Снижение активности протеина S можно обнаружить при нефротическом синдроме, беременности, лечении эстрогенами, L-аспарагиназой и др. У новорожденных с дефицитом протеина S наблюдается злокачественная пурпура (purpura fulminans).
Причины ошибок
- Гепарин из венозного катетера.
- Гемолиз в исследуемом образце крови.
- Неправильная дозировка цитрата при заборе крови.
Другие аналитические технологии Довольно широко распространен метод, основанный на применении ИФА для определения свободного протеина S и связанного с С4Ь-компонентом комплемента. Кроме того, описаны (но не представлены на рынке) функциональные методики определения этого антикоагулянта, основанные на использовании хромогенных субстратов.
Протеин С – это синтезируемый в печени белок, являющийся фактором XIV свертывания крови, одним из важнейших атикоагулянтных факторов, позволяющих крови находиться в жидком состоянии. Но для того чтобы этот фактор начал действовать, необходимо его активировать – эту задачу выполняет витамин К.
Дефицит протеина С в крови может привести к повышенному риску развития тромбов. Впрочем, нужно сказать, что эта патология встречается довольно редко. Помимо предотвращения свертывания крови протеин С способствует естественному отмиранию отработавших клеток организма и является агентом, снимающим и предотвращающим воспаление.
Норма протеина С в крови. Расшифровка результата (таблица)
Анализ крови на протеин С проводится совместно с анализом на его контрагент – протеин S, а также часто совместно с другими тестами на свертываемость крови. Его назначают, если пациент имеет необъяснимую склонность к образованию тромбов или же если тромбозы являются в данной семье генетически наследуемым заболеванием. Тем более такой анализ необходим, если тромбы образуются у пациента моложе 50 лет или в каком-то нетрадиционном месте, например, в печеночной вене или в сосудах головного мозга. Уровень протеина С необходимо выяснить при привычном выкидыше у пациентки или, если кто-то в семье страдал дефицитом этого протеина. Кроме того, анализ крови на протеин С помогает быстро выявить заболевания печени и дефицит витамина К в организме.
Забор крови производится из вены.
Норма протеина С в крови обычных людей и беременных женщин.
Если протеин С повышен, что это значит?
Как правило, повышение уровня протеина С в крови пациента не представляет клинического интереса и не используется в диагностике. Однако нужно понимать, что высокие показатели протеина С могут привести к возникновению трудноостанавливаемых кровотечений.
Если протеин С понижен, что это значит?
Дефицит протеина С в организме может быть наследственным, приобретенным или развиться в результате действия каких-то других факторов. В любом случае, снижение уровня протеина С приводит к патологиям, увеличивающим риск развития аномальных тромбов.
При умеренном дефиците протеина С пациент подвергается риску развития тромбоза глубоких вен. Такие тромбы образуются в венах, расположенных вдали от поверхности кожи и чрезвычайно опасны тем, что могут привести к легочной эмболии. Хотя, в большинстве случаев патологические тромбы так и не возникают, некоторые факторы могут значительно увеличить эту угрозу. Например возраст или оперативное вмешательство беременность или малоподвижный образ жизни.
Во время беременности норма протеина С в крови может уменьшаться и дефицит протеина может привести к повышению риска возникновения тромбозов, который сохраняется и после рождения ребенка. Дело в том, что беременность сама по себе является фактором риска для развития тромбозов. Кроме того, существует мнение, что пониженный уровень протеина С в крови будущей мамы может увеличит риск возникновения выкидыша, как на раннем, так и на позднем сроке беременности.
Тяжелый дефицит протеина С может привести к чрезвычайно опасному для жизни новорожденных детей явлению – молниеносной пурпуре. Так называется патология, при которой множественные сгустки крови образуются в мелких кровеносных сосудах, расположенных по всему телу. Эти сгустки приводят к блокированию нормального кровотока, а это приводит к некрозу тканей и гибели ребенка. Но даже у тех детей, которые сумели выжить, молниеносная пурпура может повториться в дальнейшем в любое время.
Дефицит протеина С может передаваться генетически. То есть, если в вашей семье уже были случаи подобного дефицита, вы более склонны к развитию этой патологии. Однако такой дефицит может возникнуть и без связи с генетикой. Например, в случаях:
- дефицита витамина К в организме,
- тяжелых заболеваний печени:
- заболеваний почек,
- тяжелых инфекционных заболеваний,
- ДВС-синдрома,
- онкологических заболеваний и распространения метастаз.
К снижению уровня протеина С в организме может привести использование некоторых разжижающих кровь лекарственных препаратов, например – варфарина.
При постановке женщины на учет и после 30 недели беременности очень важно проводить мониторирование основных показателей гемостаза. Изменение этих показателей в период беременности носит компенсаторно-приспособительный характер и направлено на формирование нормального фето-плацентарного комплекса и на снижение кровопотери при родах. Перечислим эти изменения:
- при беременности наблюдается усиление коагулянтного потенциала (суммарная активность факторов свертывания) - возрастает уровень почти всех факторов свертывания (кроме XI и XIII);
при беременности значительно увеличивается уровень фибриногена и в конце нормально протекающей беременности он возрастает не менее чем в два раза по сравнению с небеременным состоянием.
- в повышении общего коагулянтного потенциала;
в повышении функциональной активности тромбоцитов при некотором снижении их количества;
в снижении фибринолитической активности при увеличении продуктов деградации фибрина (ПДФ);
в снижение активности антитромбина-III (АТ-III) при некотором уменьшении его содержания.
На сегодняшний день существует возможность определять достаточно обширный спектр показателей гемостаза как тканевого, так и плазменного звена. Безусловно, проводить определение всех показателей – не рационально как с клинической, так и с экономической точки зрения. Рядом авторов рекомендуется поэтапный клинико-диагностический алгоритм выявления тромбофилических состояний у беременных:
- на первом - скрининговом - этапе основную информацию о внешнем и внутреннем пути свертывания крови можно получить всего по двум тестам: протромбиновое время - ПВ (выраженное как процент активности по Квику и/или как MHO) и активированное частичное тромбопластиновое время - АЧТВ (выраженное в секундах);
при увеличении ПВ и/или АЧТВ на следующем этапе необходимо провести диагностику антифосфолипидного синдрома (АФС) [ читать об АФС и его диагностике];
при отсутствии АФС, но при увеличении значений ПВ и/или АЧТВ необходимо переходить к следующему этапу – диагностике генетически детерминированных тромбофилий.
В настоящее время известно и хорошо изучено шесть основных генетически обусловленных форм тромбофилий:
- резистентность к активированному протеину С или мутация V фактора (мутация Лейдена);
гипергомоцистеинемия;
дефицит или нарушение структуры АТ-III;
дефицит или нарушение структуры протеина С;
дефицит или нарушение структуры протеина S;
мутация гена протромбина G 20210 А;
к этому списку можно добавить увеличение активности VIII фактора, которое может быть также следствием наследственного заболевания, но, безусловно, чаще всего значительное увеличение активности этого показателя наблюдается при беременности.
Дефицит антитромбина III (АТ-III). АТ-III – естественный антикоагулянт. На его долю приходится 75 - 80% всего коагулянтного потенциала крови. Синтезируется в печени и в эндотелиальных клетках. Частота встречаемости у пациентов с тромбофилиями - 5%. Снижение активности АТ-III менее 60% может указывать на его наследственный дефицит, однако при диагностике необходимо исключить заболевания печени, т. к. нарушения ее функции наряду с септическими заболеваниями и острыми тромбозами являются главными причинами приобретенного и временного дефицита. Также при диагностике AT-III важно использовать хромогенный метод, основанный на способности плазмы инактивировать фактор Х(а).
Дефицит протеина С. Протеин С (PC) – естественный антикоагулянт, витамин К-зависимый гликопротеин, синтезируется в печени в неактивной форме. Частота встречаемости у пациентов с тромбофилиями - 4%. PC переходит в активную форму (АРС) путем взаимодействия с комплексом тромбин-тромбомодулин. Дефицит PC ведет к снижению концентрации aРС, что приводит к замедлению инактивации факторов Va и VIII(a). Различают два типа дефицитных состояний: тип I - количественный дефицит протеина С (снижен синтез или снижено время жизни белка) и тип II - нарушение структуры белка. Описаны нарушения структуры белка, приводящие к нарушению взаимодействия с фосфолипидами, тромбомодулином, факторами V/VIII и другими веществами. Протеин С можно определять различными методами: хромогенными, клоттинговыми и иммуно-химическими. Оптимальные для клинической интерпретации результаты получаются при использовании хромогенного метода.
Дефицит протеина S. Протеин S (PS) – неэнзиматический кофактор протеина С, участвует в инактивации V и VIII факторов, обладает своей, независимой от протеина С, антикоагулянтной активностью. PS – витамин К-зависимый гликопротеин, синтезируется в печени. Существует в двух формах: свободный протеин S и связанный с С4 (протеин комплимента). В норме 60 - 70% находится в связанном виде. Уровень связывания PS с С4 определяет его активность, т.к. активна только свободная форма. В норме уровень PS 80 - 120%, при беременности его уровень падает и составляет 60 - 80%. Частота встречаемости наследственного дефицита у пациентов с тромбофлиями - 4%. Наиболее точно определение концентрации свободного PS осуществляют
иммунологическим методом.
Мутация гена протромбина G 20210 А. Вследствие данной мутации увеличивается синтез протромбина. Частота встречаемости среди пациентов с тромбофилией - 1%. Диагностика - молекулярно-генетический метод.
Гипергомоцистеинемия (ГГЦ) определяется у пациентов с тромбофилией с частотой 13 - 27%. ГГЦ может быть следствием дефекта фермента или дефицита фолиевой кислоты и витаминов В12 и В6. Молекулярные механизмы, которые вызывают тромбогенные воздействия, не идентифицированы до сих пор. Определение гомоцистеина проводится методом ИФА (иммуно-ферментный анализ).
Повышенная активность VIII фактора. Постоянное повышение активности VIII фактора более 150% без одновременного повышения концентрации С-реактивного белка как показателя реакции острой фазы, отмечается примерно у 20% пациентов с тромбофилией. Наследственная причина повышения уровня VIII фактора в плазме до сих пор не идентифицирована. Определение активности VIII фактора наиболее целесообразно проводить с помощью хромогенного метода.