Määramise meetod

Koagulatsioonisüsteemi ACL TOP parameetrite automaatanalüsaator, meetod - kineetiline kolorimeetriline.

Uuritav materjal Plasma (tsitraat)

Üks olulisemaid looduslikke hüübimisvastaseid aineid.

Valk C on üks olulisemaid füsioloogilisi hüübimisinhibiitoreid. Aktiivsel kujul lõhustab ja inaktiveerib VIIIa ja Va hüübimisfaktoreid (kuid mitte faktorit V Leideni). Valk C omab antikoagulantset toimet, aktiveerib kaudselt fibrinolüüsi, piirab trombi suurust. In vivo aktiveerib valk C trombiini poolt, mida korduvalt kiirendab trombiini ja trombomoduliini kompleks (valk endoteelirakkude pinnal).

Valgu C antikoagulandi aktiivsust suurendab selle kofaktor - . C-valk sünteesitakse maksas ja on K-vitamiinist sõltuv valk, mistõttu selle aktiivsus sõltub ka K-vitamiini vaegusest ja suukaudsest antikoagulantravist. C-valgu tase vastsündinutel ja väikelastel on maksa ebaküpsuse tõttu füsioloogiliselt madalam kui täiskasvanutel. Kaasasündinud C-valgu puudulikkus on seotud kalduvusega rasketele tromboosihäiretele. Kaasasündinud füsioloogilise antikoagulandi puudulikkuse tüüpidest, nagu antitrombiin III puudulikkus, valgu C vaegus, proteiin S vaegus, on valgu C vaegus kõige levinum (0,2-0,4% elanikkonnast). Homosügootsed seisundid esinevad varases lapsepõlves koos vastsündinute fulminantse purpuriga ja on sageli surmavad ning nende vastsündinute C-valgu tase on tuvastamatu.

C-valgu vaegusega patsiendid on tavaliselt heterosügootsed, mille puhul tromboos ei teki enne teist või kolmandat eluaastat. Nende hulgas võib umbes 5%-l olla heterosügootses olekus ka V faktori mutatsioon (faktor V Leiden). Selle mutatsiooni esinemist peetakse varajase trombootilise patoloogia tekke riskiteguriks (vt geeniuuringud, trombofiilia, test nr 7171). C-valgu vaegus on seotud raseduse tüsistuste (süvaveenide tromboos, preeklampsia, emakasisene kasvupeetus ja korduvad raseduse katkemised) suurenenud riskiga. Suureneb risk varfariinist põhjustatud nahanekroosi tekkeks. Halbade harjumustega seotud riskitegurite mõju süveneb.

Kaasasündinud vaeguse haigusseisundeid saab diagnoosida, kui omandatud C-valgu vaeguse põhjused on välistatud. Proteiini C uurimine sel eesmärgil ei ole soovitatav ägeda haiguse / ägedate tromboosiepisoodide ajal valgu C tarbimise tõttu, samuti patsientidel, kes saavad suukaudset antikoagulantravi (varfariin alandab C-valgu taset).

Proteiin C on soovitatav uuesti testida pärast suukaudse koagulantravi lõpetamist (soovitavalt üks kuu pärast ravi lõppu), korrelatsioonis pereliikmete uuringuga. Valgu C puudulikkuse heterosügootides kattuvad väärtused osaliselt normaalse võrdlusvahemikuga. Valgu C aktivatsiooni rikkumine toimub patoloogilistes tingimustes, mis on seotud selliste tegurite esinemisega nagu hüpoksia, endotoksiin, interleukiin-1, kasvaja nekroosifaktor alfa, kõrge homotsüsteiini tase (mis kõik kiirendavad hüübimist, kutsudes esile koefaktori ekspressiooni ja pärssides transkriptsiooni trombomoduliini endoteelirakkude poolt).

Näidatud on C-valgu prognostilise analüüsi informatiivne väärtus septilistes tingimustes (mida iseloomustab C-valgu suurenenud tarbimine, hävimine ja sünteesi häired). Proteiini C aktiivsuse tase< 40%, а также снижение более чем на 10% за 1 день при сепсисе коррелирует с неблагоприятным прогнозом.

Kirjandus

Shorr A.F. R92 Proteiini C kontsentratsioonid raske sepsise korral: plasmataseme varajane suunamuutus ennustab tulemust Critical Care 2006, 10: R92 http://ccforum.com/content/10/3/R9.

Reaktiivide tootja metoodilised materjalid.

Valgu C sünteesi eest vastutav geen asub 2. kromosoomis (ql3-ql4). Selle füsioloogilise antikoagulandi põhiülesanne on peamiste mitteensümaatiliste hüübimisfaktorite (FVa, FVIlla) inaktiveerimine.

Kaasasündinud C-valgu puudulikkusega patsiendid on altid korduvatele tromboosidele ja trombembooliale. Valgu C vaegus on päritud autosoomselt, homosügoodid ja topeltheterosügoodid surevad varases lapsepõlves tromboosi.

Meetodi põhimõte

Meetod põhineb APTT segu (lahjendatud PTP proov, C-valgu puudulikkusega plasma, C-valgu aktivaator, APTT reaktiiv) hindamisel. Uuritud PRP proovi valk C aktiveeritakse reagendiga, mis on saadud koonu Agkistrodon contortrixi mürgist. Aktiveeritud C-proteiin hävitab uuritava proovi ja lisatud proteiin-C-defitsiidiga plasma segus sisalduvad hüübimisfaktorid Va ja Villa, mille tõttu registreeritakse pärast kaltsiumkloriidi lisamist APTT tõus. Valgu C madala aktiivsuse korral on APTT pikenemine veidi väljendunud. BTP kalibreerimisproovi lahjendused võimaldavad teil joonistada kõvera ja määrata valgu C aktiivsuse.

Reaktiivid ja seadmed

• Protein C aktivaator (Protac).
• APTT reaktiiv.
• C-valgu puudulikkusega plasma.
• puhverlahus.
• Teadaoleva proteiin C aktiivsusega PRP proov.
• Koagulomeeter.

Vereproovid uuringuteks

PRP-d kasutatakse C-valgu aktiivsuse määramiseks.

Kalibreerimiskõvera koostamiseks on vaja teadaoleva valgu C aktiivsusega PRP proovi. Kalibreerimiskõvera koostamiseks kasutatakse teadaoleva valgu C aktiivsusega lahjendatud kalibreerimisproovide uurimisel saadud hüübimisaega sekundites.

Kaasasündinud C-valgu puudulikkuse kliinilises pildis domineerivad venoosse tromboosi ja trombemboolia retsidiivid. Paljudel patsientidel esineb nahanekroosi, raseduse katkemist jne. Valgu C vaegusega vastsündinutel täheldatakse sageli pahaloomulist purpurt (purpura fulminans).

Valgu C omandatud puudulikkuse põhjuseks võib olla hepatotsüütide ebapiisav süntees, DIC-i tõttu suurenenud tarbimine, ravi kaudsete antikoagulantidega jne. Mõnedel VA-ga patsientidel on täheldatud selle aktiivsuse ülehindamist.

Vigade põhjused

• Uuringu preanalüütilise etapi vead.
• Hepariini sattumine uuritavasse verre veenikateetrist.

Muud analüütilised tehnoloogiad

Valgu C funktsionaalne aktiivsus määratakse amidolüütiliste või koagulatsioonimeetoditega.

Valgu C kontsentratsiooni määramiseks kasutatakse ELISA-d, kuid immunoloogiliste ja funktsionaalsete meetodite tulemuste võrdlemisel ilmneb valgu C molekulaarsete kõrvalekalletega patsientide tulemuste vahel erinevus.

Protein S aktiivsus

Valk S on K-vitamiinist sõltuv glükoproteiin, mis osaleb aktiveeritud valgu C mitteensümaatilise kofaktorina hüübimisfaktorite Va ja Villa proteolüütilises lagunemises. Valgu S sünteesi eest vastutav geen asub inimese 3. kromosoomis positsioonis pll.l-qll.2. Veres esineb valku S kahes versioonis: vaba valgu kujul (umbes 40%) ja C4b komponendiga seotud komplemendi kujul (umbes 60%). S-valgu aktiivsuse vähenemine suurendab tromboosi ja trombemboolia riski.

Meetodi põhimõte

Funktsionaalsed meetodid põhinevad valk S-defitsiidiga plasma ja uuritava plasma segu hüübimisaja pikenemise tõsiduse arvestamisel aktiveeritud valgu C sisestamisel testimissüsteemi. Hüübimisaja hindamiseks sellises testsüsteemis , tootjad kasutavad erinevaid hüübimisstimulaatoreid (Russelli rästikumürk, APTT reagent , aktiveeritud hüübimisfaktor IX või teised). Normaalse valgu S sisalduse korral aktiveeritud valgu C mõjul pikeneb hüübimisaeg märkimisväärselt (mitteensümaatiliste hüübimisfaktorite hävimise tõttu), S-valgu vaeguse korral on see palju vähem väljendunud ( mitteensümaatiliste tegurite ebaefektiivse hävitamise tõttu aktiveeritud valgu C poolt).

Reaktiivid ja seadmed

• Valgu S-puudulik plasma.
• Aktiveeriv reaktiiv (fosfolipiidid, Russelli rästiku mürk või muud aktivaatorid, hepariini neutraliseerija jne)
• Aktiveeritud valk C.
• Kaltsiumkloriidi lahus (0,025 M).
• puhverlahus.
• Teadaoleva S-valgu sisaldusega PRP proov.
• Koagulomeeter.

Vereproovid uurimiseks PRP-d kasutatakse S-valgu aktiivsuse määramiseks.

Määramise meetod

Proteiini S aktiivsuse määramise käik erineb erinevate tootjate reaktiivide ja seadmete kasutamisel oluliselt, mistõttu peab laboriarsti tegevuste jada rangelt järgima reaktiivikomplekti juhiseid ja selle kohandamist laboris saadaolevale koagulomeetrile.

Uuringu tulemuste hindamine

Teadaoleva valgu S kontsentratsiooniga lahjendatud BTP proovide hüübimisaja uurimine võimaldab teil koostada kalibreerimiskõvera ja määrata selle füsioloogilise antikoagulandi aktiivsuse protsendina normist.

Tervetel inimestel on S-valgu aktiivsus vahemikus 60-130%.

Õpitulemuste tõlgendamine

Kaasasündinud S-valgu defitsiit on hemostaasi antikoagulandi seose haruldane defekt. S-valgu vaeguse esimese kirjelduse esitas 1984. aastal H.R. Schwarz jt. Selle haiguse kliinilises pildis domineerivad korduv flebotromboos ja trombemboolia. Nagu paljud teised hemostaasi antikoagulandi lingi defektid, edastatakse see patoloogia autosoomselt. On tavaks eristada kolme tüüpi kaasasündinud S-valgu puudulikkust.

Kaasasündinud S-valgu puudulikkuse variandid

• Tüüp: I Koalitsioonimeetod: Vähendatud; Vaba valk S: vähenenud; Üldvalgu S: vähenenud.
• Tüüp: II Koalitsioonimeetod: Vähendatud; Vaba valk S: normaalne; Üldvalk S: normaalne.
• Tüüp: III Koalitsioonimeetod: Vähendatud; Vaba valk S: vähenenud; Üldvalk S: normaalne.

I tüüpi iseloomustab madal S-valgu sisaldus, kasutades selle immunoloogilise määramise erinevaid variante, samuti selle funktsionaalse aktiivsuse vähenemine. II tüüpi puudulikkuse korral täheldatakse funktsionaalse aktiivsuse langust, kuid S-valgu kogu- ja vaba fraktsioonid ei ole kahjustatud. III tüüp avaldub valgu S ja selle vaba fraktsiooni funktsionaalse aktiivsuse kombineeritud vähenemises. Seega on S-valgu puudulikkuse tüübi tuvastamiseks vaja selle määramiseks kasutada koagulatsiooni ja immunoloogilisi meetodeid.

Kliinilises praktikas esineb palju sagedamini omandatud S-valgu puudulikkust S-valgu aktiivsuse langust saab tuvastada nefrootilise sündroomi, raseduse, östrogeeni-, L-asparaginaas-ravi jne korral.S-valgu vaegusega vastsündinutel on pahaloomuline purpur (purpura fulminans).

Vigade põhjused

• Hepariin veenikateetrist.
• Hemolüüs uuritavas vereproovis.
• Tsitraadi vale annus vere võtmisel.

Muud analüütilised meetodid Üsna levinud meetod põhineb ELISA kasutamisel vaba valgu S määramiseks ja on seotud komplemendi C4b komponendiga. Lisaks on kirjeldatud (kuid ei ole turustatud) selle antikoagulandi määramise funktsionaalseid meetodeid, mis põhinevad kromogeensete substraatide kasutamisel.

Valk C on maksas sünteesitav valk, mis on XIV hüübimisfaktor, üks olulisemaid antikoagulantseid tegureid, mis võimaldab verel olla vedelas olekus. Kuid selleks, et see tegur hakkaks toimima, on vaja see aktiveerida - seda ülesannet täidab K-vitamiin.

Valgu C defitsiit veres võib suurendada verehüüvete tekke riski. Siiski tuleb öelda, et see patoloogia on üsna haruldane. Lisaks vere hüübimise ennetamisele soodustab C-proteiin kulunud keharakkude loomulikku surma ning on põletikku leevendav ja ennetav aine.

C-valgu norm veres. Tulemuse tõlgendamine (tabel)

Valgu C vereanalüüs tehakse koos selle vaste, valgu S analüüsiga ja sageli koos teiste verehüübimistestidega. Seda määratakse juhul, kui patsiendil on seletamatu kalduvus trombide tekkeks või kui tromboos on selles perekonnas geneetiliselt pärilik haigus. Lisaks on selline analüüs vajalik, kui verehüübed tekivad alla 50-aastasel patsiendil või mõnes ebatraditsioonilises kohas, näiteks maksaveenis või aju veresoontes. C-valgu taset tuleks kontrollida, kui patsiendil on tavaline raseduse katkemine või kui kellelgi perekonnas on selle valgu puudus. Lisaks aitab C-valgu vereanalüüs kiiresti tuvastada maksahaigusi ja K-vitamiini puudust organismis.

Veri võetakse veenist.

C-valgu norm tavaliste inimeste ja rasedate naiste veres.

Kui C-valgu sisaldus on tõusnud, mida see tähendab?

Reeglina ei paku C-valgu taseme tõus patsiendi veres kliinilist huvi ja seda ei kasutata diagnoosimisel. Siiski peate mõistma, et kõrge valgu C tase võib põhjustada raskesti peatatava verejooksu.

Kui C-valgu sisaldus on madal, mida see tähendab?

Valgu C puudus organismis võib olla pärilik, omandatud või tekkida mõne muu teguri tagajärjel. Igal juhul põhjustab C-valgu taseme langus patoloogiaid, mis suurendavad ebanormaalsete verehüüvete tekke riski.

Mõõduka C-valgu vaeguse korral on patsiendil oht süvaveenide tromboosi tekkeks. Need trombid tekivad veenides, mis asuvad nahapinnast kaugel ja on äärmiselt ohtlikud, kuna võivad põhjustada kopsuembooliat. Kuigi enamikul juhtudel patoloogilisi verehüübeid ei teki, võivad mõned tegurid seda ohtu oluliselt suurendada. Näiteks vanus või operatsioon, rasedus või istuv eluviis.

Raseduse ajal võib C-valgu sisaldus veres langeda ja valgupuudus võib kaasa tuua tromboosiriski suurenemise, mis püsib ka pärast lapse sündi. Fakt on see, et rasedus ise on tromboosi tekke riskitegur. Lisaks ollakse arvamusel, et C-valgu vähenemine lapseootel ema veres võib suurendada raseduse katkemise ohtu nii varajases kui ka hilises raseduses.

Tõsine C-valgu vaegus võib vastsündinutel kaasa tuua äärmiselt eluohtliku nähtuse – fulminantse purpuri. See on patoloogia nimetus, mille korral kogu kehas asuvates väikestes veresoontes moodustuvad mitmed verehüübed. Need trombid põhjustavad normaalse verevoolu ummistumist, mis põhjustab kudede nekroosi ja lapse surma. Kuid isegi neil lastel, kellel õnnestus ellu jääda, võib välkpurpur tulevikus igal ajal korduda.

C-valgu vaegus võib olla geneetiliselt ülekantud. See tähendab, et kui teie perekonnas on juba esinenud selliseid puudusi, on teil suurem tõenäosus selle patoloogia tekkeks. Selline puudus võib aga tekkida ka ilma seoseta geneetikaga. Näiteks järgmistel juhtudel:

• K-vitamiini puudus organismis,
• raske maksahaigus:
• neeruhaigus,
• rasked nakkushaigused
• DIC,
• vähk ja metastaaside levik.

Teatud verd vedeldavate ravimite, näiteks varfariini kasutamine võib põhjustada C-valgu taseme langust organismis.

Naise registreerimisel ja pärast 30. rasedusnädalat on väga oluline jälgida hemostaasi peamisi näitajaid. Nende näitajate muutus raseduse ajal on kompenseeriva-adaptiivse iseloomuga ja suunatud normaalse loote-platsenta kompleksi moodustamisele ja verekaotuse vähendamisele sünnituse ajal. Loetleme need muudatused:

raseduse ajal suureneb hüübimispotentsiaal (hüübimisfaktorite koguaktiivsus) - peaaegu kõigi hüübimisfaktorite tase tõuseb (välja arvatud XI ja XIII);
raseduse ajal suureneb fibrinogeeni tase oluliselt ja normaalse raseduse lõpus tõuseb see vähemalt kaks korda võrreldes mitteraseda seisundiga.

üldise koagulandipotentsiaali suurendamisel;
trombotsüütide funktsionaalse aktiivsuse suurendamisel nende arvu vähese vähenemisega;
fibrinolüütilise aktiivsuse vähenemises koos fibriini lagunemisproduktide (PDF) suurenemisega;
antitrombiin-III (AT-III) aktiivsuse vähenemises koos selle sisalduse vähese vähenemisega.

Praeguseks on võimalik määrata üsna laias valikus hemostaasi näitajaid nii kudede kui ka plasmatasemete kohta. Loomulikult ei ole ratsionaalne läbi viia kõigi näitajate määramist nii kliinilisest kui ka majanduslikust seisukohast. Mitmed autorid soovitavad rasedate naiste trombofiilsete seisundite tuvastamiseks etapiviisilist kliinilise diagnostika algoritmi:

esimeses - skriiningu - etapis saab põhiteavet verehüübimise väliste ja sisemiste radade kohta ainult kahe testi abil: protrombiiniaeg - PT (väljendatud protsendina kiirest aktiivsusest ja/või MHO-st) ja aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg. - APTT (väljendatud sekundites);
PT ja/või APTT suurenemisega on järgmiseks sammuks antifosfolipiidide sündroomi (APS) diagnoosimine. lugeda APS-i ja selle diagnoosimise kohta];
APS-i puudumisel, kuid PT ja / või APTT väärtuste suurenemisega, on vaja liikuda järgmisele etapile - geneetiliselt määratud trombofiilia diagnoosimisele.

Praegu on teada ja hästi uuritud kuus peamist geneetiliselt määratud trombofiilia vormi:

resistentsus aktiveeritud C-valgu või faktori V mutatsiooni suhtes (Leideni mutatsioon);
hüperhomotsüsteineemia;
AT-III struktuuri puudus või rikkumine;
valgu C defitsiit või struktuuri rikkumine;
valgu S defitsiit või struktuuri rikkumine;
protrombiin G 20210 A geeni mutatsioon;
Sellesse loendisse võime lisada VIII faktori aktiivsuse tõusu, mis võib olla ka päriliku haiguse tagajärg, kuid loomulikult on kõige sagedamini täheldatud selle indikaatori aktiivsuse olulist tõusu raseduse ajal.

Antitrombiin III (AT-III) defitsiit. AT-III on looduslik antikoagulant. See moodustab 75–80% kogu vere hüübimispotentsiaalist. Sünteesitakse maksas ja endoteelirakkudes. Esinemissagedus trombofiiliaga patsientidel on 5%. AT-III aktiivsuse vähenemine alla 60% võib viidata selle pärilikule puudulikkusele, kuid diagnoosimisel on vaja välistada maksahaigused, kuna selle funktsiooni häired koos septiliste haiguste ja ägeda tromboosiga on peamised põhjused. omandatud ja ajutine puudus. Samuti on AT-III diagnoosimisel oluline kasutada kromogeenset meetodit, mis põhineb plasma võimel inaktiveerida faktorit X(a).

Proteiini C defitsiit.Protein C (PC), looduslik antikoagulant, K-vitamiinist sõltuv glükoproteiin, sünteesitakse maksas inaktiivsel kujul. Esinemissagedus trombofiiliaga patsientidel on 4%. PC läheb aktiivsesse vormi (APC) interakteerudes trombiini-trombomoduliini kompleksiga. PC defitsiit viib aPC kontsentratsiooni vähenemiseni, mis viib faktorite Va ja VIII(a) inaktiveerimise aeglustumiseni. Defitsiidiseisundeid on kahte tüüpi: I tüüp – valgu C kvantitatiivne defitsiit (vähenenud süntees või vähenenud valgu eluiga) ja II tüüp – valgu struktuuri rikkumine. Kirjeldatud valgu struktuuri rikkumisi, mis põhjustavad fosfolipiidide, trombomoduliini, V/VIII faktorite ja muude ainetega koostoime katkemist. Valku C saab määrata erinevate meetoditega: kromogeenne, hüübimis- ja immunokeemiline. Kliinilise tõlgendamise optimaalsed tulemused saadakse kromogeense meetodi abil.

Valk S defitsiit. Protein S (PS) on valgu C mitteensümaatiline kofaktor, osaleb faktorite V ja VIII inaktiveerimises ning sellel on C-valgust sõltumatu antikoagulantne toime. PS on K-vitamiinist sõltuv glükoproteiin, mida sünteesitakse maksas. See eksisteerib kahes vormis: vaba valk S ja seotud C4-ga (komplimentvalk). Tavaliselt on 60–70% seotud kujul. PS-i C4-ga seondumise tase määrab selle aktiivsuse, tk. ainult vaba vorm on aktiivne. Tavaliselt langeb PS tase 80–120%, raseduse ajal selle tase langeb ja on 60–80%. Päriliku puudulikkuse esinemissagedus tromboosiga patsientidel on 4%. Kõige täpsemini määratakse vaba PS kontsentratsioon
immunoloogiline meetod.

Protrombiini geeni G 20210 A mutatsioon. Selle mutatsiooni tulemusena suureneb protrombiini süntees. Esinemissagedus trombofiiliaga patsientidel on 1%. Diagnoos – molekulaargeneetiline meetod.

Hüperhomotsüsteineemia (HHC) määratakse trombofiiliaga patsientidel sagedusega 13–27%. HHC võib olla tingitud ensüümi defektist või foolhappe ja vitamiinide B12 ja B6 puudusest. Molekulaarseid mehhanisme, mis põhjustavad trombogeenset toimet, ei ole veel kindlaks tehtud. Homotsüsteiini määramine toimub ELISA-ga (ensümaatiline immunoanalüüs).

VIII faktori aktiivsuse suurenemine. Ligikaudu 20% trombofiiliaga patsientidest täheldatakse VIII faktori aktiivsuse püsivat tõusu üle 150% ilma samaaegse C-reaktiivse valgu kui ägeda faasi reaktsiooni indikaatori kontsentratsiooni suurenemiseta. VIII faktori plasmataseme tõusu pärilikku põhjust ei ole veel kindlaks tehtud. VIII faktori aktiivsuse määramine on kõige sobivam kromogeense meetodi abil.