Масонабір

Що свідчить аналіз протеїн с. Визначення активності системи протеїну с. Хто призначає аналіз крові на протеїни S та C

Метод визначення

Автоматичний аналізатор параметрів системи згортання ACL TOP, метод - кінетичний колориметричний.

Досліджуваний матеріалПлазма (цитрат)

Один з найважливіших природних інгібіторів згортання.

Протеїн С – один з найважливіших фізіологічних інгібіторів згортання. В активній формі він розщеплює та інактивує фактори згортання VIIIa та Va (але не фактор V Лейдена). Протеїн C проявляє антикоагулянтну активність, опосередковано активує фібриноліз, обмежує розміри тромбу. In vivo протеїн С активується тромбіном, багаторазово прискорено - комплексом тромбіну та тромбомодуліну (білок на поверхні ендотеліальних клітин).

Антикоагулянтну активність протеїну C посилює його кофактор -. Протеїн C синтезується у печінці, є вітамін К – залежним білком, тому активність його залежить також від дефіциту вітаміну K та терапії оральними антикоагулянтами. Рівень протеїну С у новонароджених та дітей молодшого віку фізіологічно нижчий, ніж у дорослих унаслідок незрілості печінки. Природжений дефіцит протеїну пов'язаний зі схильністю до важких тромботичних порушень. Серед уроджених видів дефіциту фізіологічних антикоагулянтів, таких як дефіцит антитромбіну III, дефіцит протеїну C, дефіцит протеїну S – дефіцит протеїну C найбільш поширений (0,2-0,4% популяції). Гомозиготні стани виявляються в ранньому дитинстві фульмінантною пурпурою новонароджених і часто фатальні, рівень протеїну C у таких новонароджених знаходиться на невизначеному рівні.

Пацієнти з дефіцитом протеїну С зазвичай є гетерозиготами, у яких тромбози не виявляються раніше другої-третьої декади життя. Серед них близько 5% можуть мати мутацію фактора V (фактор V Лейдена) в гетерозиготному стані. Присутність цієї мутації вважають чинником ризику ранньої тромботичної патології (див. генетичні дослідження, тромбофілії, тест № 7171). Дефіцит протеїну C пов'язаний з підвищеним ризиком ускладнень вагітності (тромбоз глибоких вен, прееклампсія, внутрішньоутробна затримка розвитку плода та повторні викидні). Відзначається збільшений ризик розвитку варфарин-індукованого некрозу шкіри. Посилюється дія факторів ризику, пов'язаних із шкідливими звичками.

Вроджені дефіцитні стани можуть бути діагностовані, коли причини набутого дефіциту протеїну C виключені. Дослідження протеїну C з цією метою не рекомендовано проводити під час гострих захворювань/гострих тромботичних епізодів внаслідок споживання протеїну С, а також у пацієнтів, які отримують терапію оральними антикоагулянтами (варфарин знижує рівень протеїну C).

Рекомендовано повторне тестування протеїну C після припинення терапії оральними коагулянтами (краще через місяць після закінчення терапії) у кореляції з обстеженням членів сім'ї. У гетерозигот за дефіцитом протеїну значення C частково перехрещуються з нормальним референсним діапазоном. Порушення активації протеїну С виникає при патологічних станах, пов'язаних з наявністю таких факторів як гіпоксія, ендотоксин, інтерлейкін-1, фактор некрозу пухлини альфа, високий рівень гомоцистеїну (усі вони прискорюють згортання, індукуючи експресію тканинного фактора і пригнічуючи транс).

Показано інформативність тестування протеїну С у прогностичних цілях у септичних станах (характеризуються підвищеним споживанням, руйнуванням та порушенням синтезу протеїну С). Рівень активності протеїну С< 40%, а также снижение более чем на 10% за 1 день при сепсисе коррелирует с неблагоприятным прогнозом.

Література

Shorr A.F. R92 Protein C concentrations in severe sepsis: на початку прямих змін в plasma levels predicts outcome Critical Care 2006,10: R92 http://ccforum.com/content/10/3/R9.

Методичні матеріали фірми-виробника реагентів.

Ген, відповідальний синтез протеїну З, локалізований на хромосомі 2 (ql3-ql4). Основна функція цього фізіологічного антикоагулянту полягає в інактивації основних неферментних факторів згортання (FVa, FVIlla).

У пацієнтів, які мають вроджену недостатність протеїну С, спостерігається схильність до рецидивуючих тромбозів та тромбоемболій. Дефіцит протеїну С успадковується аутосомно, гомозиготи та подвійні гетерозиготи гинуть у ранньому дитячому віці від тромбозів.

Принцип методу

Метод заснований на оцінці АПТВ суміші (розведений зразок БТП, дефіцитна протеїну С плазма, активатор протеїну С, АПТВ-реагент). Протеїн Досліджуваного зразка БТП активують реагентом, отриманим з отрути щитомордника Agkistrodon contortrix. Активований протеїн С руйнує коагуляційні фактори Va і Villa, що містяться в суміші досліджуваного зразка і протеїн-С-дефіцитної плазми, що додається, за рахунок чого після додавання кальцію хлориду реєструється подовження АПТВ. При низькій активності протеїну З подовження АПТВ виражено незначно. Розведення калібрувального зразка БТП дозволяють побудувати криву та визначити активність протеїну С.

Реактиви та обладнання

Активатор протеїну (Protac).
АПТВ-реагент.
Дефіцитна протеїну С плазма.
Буферний розчин.
Зразок БТП із відомою активністю протеїну С.
Коагулометр.

Зразки крові для дослідження

Для визначення активності протеїну використовують БТП.

Для побудови калібрувальної кривої необхідний зразок БТП з відомою активністю протеїну С. Для побудови калібрувального графіка використовують час згортання в секундах, отриманий при дослідженні розведених калібрувальних зразків з відомою активністю протеїну С.

У клінічній картині при вродженому дефіциті протеїну С домінують рецидиви венозних тромбозів та тромбоемболій. У ряду пацієнтів виникають шкірні некрози, невиношування вагітності та ін У новонароджених, які мають дефіцит протеїну С, нерідко спостерігається злоякісна пурпура (purpura fulminans).

Набутий дефіцит протеїну С може бути обумовлений недостатнім синтезом гепатоцитами, підвищеною витратою внаслідок ДВЗ, лікуванням непрямими антикоагулянтами та ін. У деяких пацієнтів із ВА спостерігається завищення його активності.

Причини помилок

Помилки преаналітичного етапу дослідження.
Попадання в кров гепарину, що досліджується, з венозного катетера.

Інші аналітичні технології

Функціональну активність протеїну визначають амідолітичними або коагуляційними методиками.

Для визначення концентрації протеїну використовують ІФА, однак при порівнянні результатів імунологічних і функціональних методик спостерігається розбіжність результатів у пацієнтів з молекулярними аномаліями протеїну С.

Активність протеїну S

Протеїн S - вітамін К-залежний глікопротеїд, що бере участь як неферментний кофактор активованого протеїну С в протеолітичній деградації коагуляційних факторів Va і Villa. Ген, відповідальний синтез протеїну S, розташований на хромосомі 3 людини у положенні pll.l-qll.2. У крові протеїн S представлений у двох варіантах: у вигляді вільного протеїну (близько 40%) та у вигляді пов'язаного із С4Ь-компонентом комплементу (близько 60%). Зниження активності протеїну S збільшує ризик розвитку тромбозів та тромбоемболій.

Принцип методу

Функціональні методики засновані на обліку виразності подовження часу згортання суміші дефіцитної по протеїну S плазми та досліджуваної плазми при введенні в тест-систему активованого протеїну С. Для оцінки часу згортання в подібній тест-системі виробники використовують різні стимулятори коагуляції (отрута гадюки Рассела, АП , активований коагуляційний фактор IX або ін.). При нормальному вмісті протеїну S під впливом активованого протеїну відбувається істотне подовження часу згортання (за рахунок руйнування неферментних факторів коагуляції), тоді як при недостатності протеїну S воно виражено значно слабше (за рахунок неефективного руйнування неферментних факторів активованим протеїном С).

Реактиви та обладнання

Дефіцитна протеїну S плазма.
Активуючий реагент (фосфоліпіди, отрута гадюки Рассела або інші активатори, нейтралізатор гепарину та ін.)
Активований протеїн С.
Розчин хлориду кальцію (0,025 М).
Буферний розчин.
Зразок БТП із відомим вмістом протеїну S.
Коагулометр.

Для визначення активності протеїну S використовують БТП.

Методика визначення

Хід визначення активності протеїну S істотно відрізняється при використанні реагентів та обладнання різних виробників, тому послідовність дій лікаря-лаборанта повинна суворо відповідати інструкції до набору реагентів та його адаптації до коагулометра, що є в лабораторії.

Оцінка результатів дослідження

Дослідження часу коагуляції розведених зразків БТП з відомою концентрацією протеїну S дозволяє побудувати калібрувальну криву та визначити активність цього фізіологічного антикоагулянту у відсотках від норми.

У здорових людей активність протеїну S знаходиться в діапазоні 60-130%.

Інтерпретація результатів дослідження

Вроджений дефіцит протеїну S – рідкісний дефект антикоагулянтної ланки гемостазу. Перший опис дефіциту протеїну S було представлено 1984 р. Н.Р. Schwarz at al. У клінічній картині цього захворювання домінують рецидивні флеботромбози та тромбоемболії. Як і багато інших дефектів антикоагулянтної ланки гемостазу, ця патологія передається аутосомно. Прийнято розрізняти три типи вродженого дефіциту протеїну S.

Варіанти вродженого дефіциту протеїну S

Тип: I Коаліційний метод: Знижений; Вільний протеїн S: Знижений; Загальний протеїн S: Знижений.
Тип: ІІ Коаліційний метод: Знижений; Вільний протеїн S: Норма; Загальний протеїн S: Норма.
Тип: ІІІ Коаліційний метод: Знижений; Вільний протеїн S: Знижений; Загальний протеїн S: Норма.

I тип характеризується низьким вмістом протеїну S під час використання різних варіантів його імунологічного визначення, і навіть зниженням його функціональної активності. При II типі дефіциту спостерігається зниження функціональної активності, проте загальна та вільна фракції протеїну S не порушені. III тип проявляється поєднаним зниженням функціональної активності протеїну S та вільної його фракції. Таким чином, для ідентифікації типу дефіциту протеїну S необхідно використовувати коагуляційний та імунологічний методи його визначення.

У клінічній практиці набагато частіше зустрічається набутий дефіцит протеїну S. Зниження активності протеїну S можна виявити при нефротичному синдромі, вагітності, лікуванні естрогенами, L-аспарагіназою та ін У новонароджених з дефіцитом протеїну S спостерігається злоякісна пурпура (purpura fulminans).

Причини помилок

Гепарин із венозного катетера.
Гемоліз у досліджуваному зразку крові.
Неправильне дозування цитрату при заборі крові.

Інші аналітичні технології Досить широко поширений метод, заснований на застосуванні ІФА для визначення вільного протеїну S та пов'язаного із С4Ь-компонентом комплементу. Крім того, описані (але не представлені на ринку) функціональні методики визначення цього антикоагулянту, що ґрунтуються на використанні хромогенних субстратів.

Протеїн С – це білок, що синтезується в печінці, що є фактором XIV згортання крові, одним з найважливіших атикоагулянтних факторів, що дозволяють крові перебувати в рідкому стані. Але для того, щоб цей фактор почав діяти, необхідно його активувати – це завдання виконує вітамін К.

Дефіцит протеїну С у крові може призвести до підвищеного ризику розвитку тромбів. Втім, слід сказати, що ця патологія зустрічається досить рідко. Крім запобігання зсіданню крові протеїн С сприяє природному відмиранню відпрацьованих клітин організму і є агентом, що знімає і запобігає запаленню.

Норма протеїну С у крові. Розшифровка результату (таблиця)

Аналіз крові на протеїн С проводиться спільно з аналізом на його контрагент - протеїн S, а також часто спільно з іншими тестами на згортання крові. Його призначають, якщо пацієнт має незрозумілу схильність до утворення тромбів або якщо тромбози є в цій сім'ї генетично успадкованим захворюванням. Тим більше такий аналіз необхідний, якщо тромби утворюються у пацієнта молодше 50 років або в якомусь нетрадиційному місці, наприклад, печінковій вені або судинах головного мозку. Рівень протеїну С необхідно з'ясувати при звичному викидні у пацієнтки або, якщо хтось у сім'ї страждав на дефіцит цього протеїну. Крім того, аналіз крові на протеїн С допомагає швидко виявити захворювання печінки та дефіцит вітаміну К в організмі.

Забір крові виготовляється з вени.

Норма протеїну С у крові звичайних людей та вагітних жінок.

Якщо протеїн С підвищено, що це означає?

Як правило, підвищення рівня протеїну С у крові пацієнта не становить клінічного інтересу та не використовується у діагностиці. Однак потрібно розуміти, що високі показники протеїну С можуть призвести до виникнення кровотеч, що важко зупиняються.

Якщо протеїн С знижений, що це означає?

Дефіцит протеїну С в організмі може бути спадковим, набутим або розвинутися внаслідок дії якихось інших факторів. У будь-якому випадку зниження рівня протеїну С призводить до патологій, що збільшують ризик розвитку аномальних тромбів.

При помірному дефіциті протеїну С пацієнт наражається на ризик розвитку тромбозу глибоких вен. Такі тромби утворюються у венах, розташованих далеко від поверхні шкіри та надзвичайно небезпечні тим, що можуть призвести до легеневої емболії. Хоча в більшості випадків патологічні тромби так і не виникають, деякі фактори можуть значно збільшити цю загрозу. Наприклад, вік або оперативне втручання вагітність або малорухливий спосіб життя.

Під час вагітності норма протеїну С у крові може зменшуватись та дефіцит протеїну може призвести до підвищення ризику виникнення тромбозів, який зберігається і після народження дитини. Справа в тому, що вагітність сама по собі є фактором ризику для розвитку тромбозів. Крім того, існує думка, що знижений рівень протеїну С у крові майбутньої мами може збільшити ризик виникнення викидня як на ранньому, так і на пізньому терміні вагітності.

Тяжкий дефіцит протеїну С може призвести до надзвичайно небезпечного для життя новонароджених дітей явища – блискавичної пурпури. Так називається патологія, за якої множинні згустки крові утворюються в дрібних кровоносних судинах, розташованих по всьому тілу. Ці згустки призводять до блокування нормального кровотоку, а це призводить до некрозу тканин та загибелі дитини. Але навіть у дітей, які зуміли вижити, блискавична пурпура може повторитися надалі в будь-який час.

Дефіцит протеїну може передаватися генетично. Тобто, якщо у вашій родині вже були випадки такого дефіциту, ви більш схильні до розвитку цієї патології. Однак такий дефіцит може виникнути без зв'язку з генетикою. Наприклад, у випадках:

дефіциту вітаміну К в організмі,
тяжких захворювань печінки:
захворювань нирок,
тяжких інфекційних захворювань,
ДВС-синдрому,
онкологічних захворювань та поширення метастаз.

До зниження рівня протеїну С в організмі може призвести використання деяких лікарських препаратів, що розріджують кров, наприклад – варфарину.

При постановці жінки на облік та після 30 тижнів вагітності дуже важливо проводити моніторування основних показників гемостазу. Зміна цих показників у період вагітності носить компенсаторно-пристосувальний характер і спрямовано формування нормального фето-плацентарного комплексу та зниження крововтрати при пологах. Перелічимо ці зміни:

Таким чином, при вагітності в організмі жінки створюються певні умови для розвитку синдрому дисемінованого внутрішньосудинного згортання (ДВС-синдром): це виражається:

Перераховані вище особливості гемостазу при вагітності крім змін компенсаторно-пристосувального (позитивного) характеру можуть призводити і до негативних наслідків – до розвитку тромбозів (частота розвитку тромбофілій - станів, при яких різко збільшується ризик розвитку тромбозів і тромбоемболії - при вагітності може досягати 30%). і це, як було зазначено вище, спричиняє високу актуальність (значимість) моніторування основних показників гемостазу в період вагітності.

На сьогоднішній день існує можливість визначати досить широкий спектр показників гемостазу як тканинної, так і плазмової ланки. Безумовно, проводити визначення всіх показників – не раціонально як із клінічної, так і з економічної точки зору. Поруч авторів рекомендується поетапний клініко-діагностичний алгоритм виявлення тромбофілічних станів у вагітних:

читати

В даний час відомо і добре вивчено шість основних генетично обумовлених форм тромбофілій:

Резистентність до активованого протеїну (мутація V фактора). Відомо, що з шести вище перерахованих форм тромбофілій найчастішим фактором ризику в європейській популяції є резистентність до активованого протеїну С (мутація V фактора – у гетерозигот ризик розвитку тромбозів зростає у 5 – 10 разів, а у гомозигот у 50 – 100 разів). Частота народження мутації V фактора у пацієнтів з тромбофіліями досягає 40%. Діагностика резистентності активованого протеїну С(аРС)може проводитися різними методами, але найзручнішим скринінговим методом є клотинговий метод на коагулометрі з використанням діагностичних наборів.

Дефіцит антитромбіну ІІІ (АТ-ІІІ). АТ-III - природний антикоагулянт. На його частку припадає 75-80% всього коагулянтного потенціалу крові. Синтезується в печінці та в ендотеліальних клітинах. Частота народження пацієнтів з тромбофіліями - 5%. Зниження активності АТ-III менше 60% може вказувати на його спадковий дефіцит, проте при діагностиці необхідно виключити захворювання печінки, тому що порушення її функції поряд із септичними захворюваннями та гострими тромбозами є головними причинами набутого та тимчасового дефіциту. Також при діагностиці AT-III важливо використовувати хромогенний метод, що ґрунтується на здатності плазми інактивувати фактор Х(а).

Дефіцит протеїну С. Протеїн С (PC) – природний антикоагулянт, вітамін К-залежний глікопротеїн, синтезується у печінці у неактивній формі. Частота народження пацієнтів з тромбофіліями - 4%. PC перетворюється на активну форму (АРС) шляхом взаємодії з комплексом тромбін-тромбомодулін. p align="justify"> Дефіцит PC веде до зниження концентрації aРС, що призводить до уповільнення інактивації факторів Va і VIII(a). Розрізняють два типи дефіцитних станів: тип I – кількісний дефіцит протеїну С (знижений синтез або знижений час життя білка) та тип II – порушення структури білка. Описано порушення структури білка, що призводять до порушення взаємодії з фосфоліпідами, тромбомодуліном, факторами V/VIII та іншими речовинами. Протеїн можна визначати різними методами: хромогенними, клоттинговими та імуно-хімічними. Оптимальні для клінічної інтерпретації результати виходять під час використання хромогенного методу.

Дефіцит протеїну S. Протеїн S (PS) – неензиматичний кофактор протеїну С, бере участь в інактивації V і VIII факторів, має свою, незалежну від протеїну С, антикоагулянтну активність. PS – вітамін К-залежний глікопротеїн, що синтезується в печінці. Існує у двох формах: вільний протеїн S і пов'язаний із С4 (протеїн компліменту). У нормі 60 - 70% перебуває у зв'язаному вигляді. Рівень зв'язування PS із С4 визначає його активність, т.к. активна лише вільна форма. У нормі рівень PS 80 – 120%, при вагітності його рівень падає та становить 60 – 80%. Частота народження спадкового дефіциту у пацієнтів з тромбофліями - 4%. Найбільш точно визначення концентрації вільного PS здійснюють
імунологічним методом.

Мутація гена протромбіну G 20210 А. Внаслідок цієї мутації збільшується синтез протромбіну. Частота народження серед пацієнтів з тромбофілією - 1%. Діагностика – молекулярно-генетичний метод.

Гіпергомоцистеїнемія (ГГЦ) визначається у пацієнтів із тромбофілією із частотою 13 – 27%. ГГЦ може бути наслідком дефекту ферменту або дефіциту фолієвої кислоти та вітамінів В12 та В6. Молекулярні механізми, що викликають тромбогенні дії, не ідентифіковані досі. Визначення гомоцистеїну проводиться методом ІФА (імуно-ферментний аналіз).

Підвищена активність фактора VIII. Постійне підвищення активності фактора VIII більше 150% без одночасного підвищення концентрації С-реактивного білка як показника реакції гострої фази, відзначається приблизно у 20% пацієнтів з тромбофілією. Спадкова причина підвищення рівня VIII фактора у плазмі досі не ідентифікована. Визначення активності фактора VIII найбільш доцільно проводити за допомогою хромогенного методу.